激光共聚焦顯微鏡是一種利用計算機、激光和圖像處理技術獲得生物樣品三維數據、目前最先進的分子細胞生物學的分析儀器。主要用于觀察活細胞結構及特定分子、離子的生物學變化,定量分析,以及實時定量測定等。
激光共聚焦顯微鏡的結構組成:
激光共聚焦顯微鏡系統主要包括掃描模塊、激光光源、熒光顯微鏡、數字信號處理器、計算機以及圖像輸出設備等。
(1)掃描模塊
掃描模塊主要由針孔光欄、分光鏡、發射熒光分色器、檢測器組成。熒光樣品中的混合熒光進入掃描器,經過檢測針孔光欄、分光鏡和分色器選擇后,被分成各單色熒光,分別在不同的熒光通道進行檢測并形成相應的共焦圖象,同時在計算機屏幕上可以顯示幾個并列的單色熒光圖象及其合成圖象。
(2)熒光顯微鏡系統
顯微鏡是LSCM的主要組件,它關系到系統的成像質量。顯微鏡光路以無限遠光學系統可方便地在其中插人光學選件而不影響成像質量和測量精度。物鏡應選取大數值孔徑平場復消色差物鏡,有利于熒光的采集和成像的清晰。物鏡組的轉換,濾色片組的選取,載物臺的移動調節,焦平面的記憶鎖定都應由計算機自動控制。
激光掃描共聚焦顯微鏡所用的熒光顯微鏡大體與常規熒光顯微鏡相同,但又有其特點:需與掃描器連接,使激光能進入顯微鏡物鏡照射樣品,并使樣品發射的熒光到達檢測器;需有光路轉換裝置,即汞燈與激光轉換,同時汞燈光線強度可調。
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